അടിസ്ഥാന ആമുഖം
ചുവന്ന രക്താണുക്കൾ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനുള്ള ഏറ്റവും ലളിതവും എളുപ്പവുമായ മാർഗ്ഗങ്ങളിലൊന്നാണ് എറിത്രോസൈറ്റ് ലൈസേറ്റ്, അതായത്, ന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് കോശങ്ങളെ നശിപ്പിക്കാത്തതും ചുവന്ന രക്താണുക്കളെ പൂർണ്ണമായും നീക്കം ചെയ്യുന്നതുമായ ലൈസേറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ചുവന്ന രക്താണുക്കളെ വിഭജിക്കാൻ. എൻസൈം ദഹനം, ലിംഫോസൈറ്റുകളുടെ വേർതിരിക്കൽ, ശുദ്ധീകരണം, ടിഷ്യു പ്രോട്ടീൻ, ന്യൂക്ലിക് എന്നിവയുടെ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ചുവന്ന രക്താണുക്കളുടെ നീക്കം ചെയ്യൽ, എൻസൈം ദഹനം എന്നിവയാൽ ചിതറിക്കിടക്കുന്ന ടിഷ്യു കോശങ്ങളെ വേർതിരിക്കാനും ശുദ്ധീകരിക്കാനും ഇത് പ്രധാനമായും ഉപയോഗിക്കുന്നു. ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ. ചുവന്ന രക്താണുക്കളുടെ ലൈസേറ്റ് വഴി ലഭിക്കുന്ന ടിഷ്യു കോശങ്ങളിൽ ചുവന്ന രക്താണുക്കൾ അടങ്ങിയിട്ടില്ല, കൂടാതെ പ്രാഥമിക സംസ്കരണം, സെൽ ഫ്യൂഷൻ, ഫ്ലോ സൈറ്റോമെട്രി, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെയും പ്രോട്ടീനിന്റെയും വേർതിരിക്കൽ, വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ മുതലായവയ്ക്ക് ഇത് കൂടുതൽ ഉപയോഗിക്കാം.
ഉപയോഗിക്കുന്നതിനുള്ള നിർദ്ദേശങ്ങൾ
ടിഷ്യു സെൽ സാമ്പിൾ
1. പുതിയ ടിഷ്യൂകൾ പാൻക്രിയാസ്/എൻസൈം അല്ലെങ്കിൽ കൊളാജനേസ് വഴി ദഹിപ്പിക്കപ്പെടുകയും സിംഗിൾ സെൽ സസ്പെൻഷനിലേക്ക് ചിതറിക്കിടക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, കൂടാതെ അപകേന്ദ്രീകരണം വഴി സൂപ്പർനാറ്റന്റ് ഉപേക്ഷിക്കപ്പെട്ടു.
2. 4â-ൽ റഫ്രിജറേറ്ററിൽ നിന്ന് ELS lysate എടുക്കുക, 1:3-5 എന്ന അനുപാതത്തിൽ ELS lysate സെൽ precipitate-ലേക്ക് ചേർക്കുക (3-5ml lysate 1ml സെൽ കോംപാക്റ്റ് ചെയ്തതിൽ ചേർക്കുക), പതുക്കെ ഊതി ഇളക്കുക.
3. 800-1000rpm-ൽ 5-8 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്ത് മുകളിലെ ചുവന്ന തെളിഞ്ഞ ദ്രാവകം ഉപേക്ഷിക്കുക.
4. അവശിഷ്ടമായ ഭാഗം ശേഖരിച്ച് 2-3 തവണ ഹാങ്കിന്റെ ലായനി അല്ലെങ്കിൽ സെറം രഹിത കൾച്ചർ ലായനി ഉപയോഗിച്ച് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്തു.
5, വിള്ളൽ പൂർണ്ണമല്ലെങ്കിൽ/പൂർണ്ണമായില്ലെങ്കിൽ 2, 3 ഘട്ടങ്ങൾ ആവർത്തിക്കാം.
6. തുടർന്നുള്ള പരീക്ഷണങ്ങൾക്കുള്ള റെസസ്പെൻഷൻ സെല്ലുകൾ; RNA വേർതിരിച്ചെടുത്താൽ, DEPC വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെപ്പ് 4-ൽ നിന്ന് തയ്യാറാക്കിയ ലായനിയിൽ അത് ചെയ്യുന്നതാണ് നല്ലത്.
ചുവന്ന രക്താണുക്കൾക്ക് വളരെ ചെറിയ ജീവിത ചക്രം മാത്രമേ ഉള്ളൂ, 120 ദിവസങ്ങൾ മാത്രം, എന്നാൽ അവ വളരെ വേഗത്തിൽ രക്തം പുനർനിർമ്മിക്കുന്നു, ഈ സാഹചര്യത്തിൽ അവ കോശവിഭജനത്തിന് പ്രത്യേകിച്ച് കഴിവുള്ളവയാണ്, അവ എല്ലാറ്റിനെയും ഏറ്റവും വേഗത്തിൽ വിഭജിക്കുന്ന കോശങ്ങളാണ്, അതിനാൽ ഈ സെൽ വളരെ വിലപ്പെട്ടതാണ്. അതിനാൽ കോശ സംസ്ക്കാരത്തിന് ഇത് വളരെ ഉപയോഗപ്രദമാണ്. ഇത് വളരെ ലളിതമാണ്, അതിൽ അവയവങ്ങളൊന്നുമില്ല, കോശ സ്തരങ്ങളും പ്രോട്ടീനുകളും മാത്രം.